由于血清泌乳素（PRL）水平受许多因素影响，故应清晨空腹进行采血测定。若泌乳素水平在正常上限3倍以下，应至少检测两次以确定有无高泌乳素血症。
高泌乳素血症根据病因可分为以下三类：
（一）生理性因素
妊娠、哺乳、运动、熟睡、性交、压力状态等均可致高泌乳素血症。手术等压力状态下PRL升高与压力程度相关，一旦压力解除，PRL将恢复正常。
（二）病理性因素
慢性肾功能不全患者，肾小球对PRL滤过率降低，可导致血清PRL中度升高，约三分之一肾脏病患者存在高泌乳素血症。甲状腺功能减退症患者中约有20％存在PRL水平轻度升高，可能由于长期甲减或甲减治疗不充分，造成垂体增生，导致类似垂体瘤的病理生理改变。此时补充甲状腺激素可降低PRL水平并使增生的垂体缩小。
较大的非功能性垂体瘤、下丘脑肉芽肿性病变、颅咽管瘤、蝶鞍上手术等因素使垂体柄受压或多巴胺神经元受损，造成到达泌乳素细胞的多巴胺水平下降，可导致高泌乳素血症的发生，此时PRL水平一般在20μg/L~100μg/L之间。
且使用多巴胺受体激动剂可使PRL水平降低。特发性高泌乳素血症病因不明，可能由于下丘脑调节机能改变所致。在排除生理性、药物性及其他病理性因素后，方可确立诊断。其中有不到10％的患者可能存在较小的泌乳素微腺瘤但未被影像学检查发现。约30％特发性高泌乳素血症患者可自行缓解；10％~15％PRL水平进一步升高；其余PRL水平保持稳定。
由于泌乳素细胞与生长激素细胞存在一定同源性，有约50％肢端肥大症患者存在高泌乳素血症；另外，由于人体GH与PRL一样有催乳作用，故生长激素瘤患者症状体征可与泌乳素瘤者类似，应注意排查。多囊卵巢综合征患者中约有30％存在高泌乳素血症。其他垂体病变，如淋巴细胞性垂体炎、TSH瘤等，亦可导致高泌乳素血症。
（三）药物因素
许多药物可促进PRL分泌，例如抗精神病药物可通过降低多巴胺水平或拮抗其作用导致PRL水平升高。其他如某些麻醉药、抗抑郁药、抗组胺药物等亦可导致高泌乳素血症。大多数由药物引起的高泌乳素血症患者PRL<150μg/L。
值得注意的是，由于泌乳素瘤可能与其他引起高泌乳素血症的因素同时存在，故即使PRL水平只是轻度升高，也应进行垂体影像学检查。